2.5 使用双位点特异性PCR体系鉴定受试样品 使用以上建立的鉴别体系，对草珊瑚、金粟兰各样品进行鉴别，同时用该体系鉴别草珊瑚、金粟兰的混合DNA样品，受试样品DNA质量浓度2.5～5 mg·L^-1，并对草珊瑚与金粟兰干燥叶片DNA 样品进行鉴定。

    3 结果与分析

    3.1 引物设计 根据本实验测序所获得的草珊瑚、金粟兰的ITS全长序列及GenBank中已有的序列，用ClustalX 2.1软件对所有序列进行多重比较，筛选获得草珊瑚、金粟兰的特异位点，发现在ITS1区，位于ITS全长序列第110～130位点及第235～252位点有多个SNP位点，根据第110～130位点的SNP位点设计草珊瑚特异的鉴别引物SgF，另外根据第235～252位点有多个SNP位点设计金粟兰特异位的鉴别引物CsF(图1，表2)。

    3.2 鉴别草珊瑚、金粟兰多重PCR体系优化 首先利用草珊瑚及金粟兰的特异性引物SgF ......